Aislamiento e identificación de genes expresados diferencialmente en respuesta al plomo en Salvinia minima / José David Reyes Uh Ramos

Tesis (Maestría en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2008.

Algunos reportes indican que en México existe contaminación por Plomo (Pb). Una de las alternativas para limpiar cuerpos de agua comtaminados c n Pb es la fitorremediación, que consiste en la utilización de plantas para restaurar ambientes contaminados. Salvinia minima posee gran potencial para la fitorremediación, ya Que puede acumular altas concentraciones de Pb en sus tejidos. En El presente trabajo se abordó el aislamiento y la identificación de Genes expresados diferencialmente en respuesta al Pb en S. minima, con la finalidad de entender las bases genéticas de las respuestas bioquímicas y fisiológicas ante este metal. Se probaron diversos métodos para la extracción de ARN total de plantas de S. minima tratadas con O y 40 IJM de PbNO3 por 12 h. Los métodos fueron comparados en base a la cantidad y la pureza del ARN extraído. El mejor método para la extracción de ARN total fue el CTAB modificado. Este ARN total sirvió para la purificación de ARNm poli A de alta calidad para la construcción de una biblioteca sustractiva, obteniéndose alrededor de 400 clonas. Las clonas fueron secuenciadas y las secuencias que se clasificaron como el Hit 1 del análisis BLASTN, fueron utilizadas para realizar una clasificación funcional. Las clonas aisladas poseen secuencias de alta calidad, no repetitivas y mayores a 0.5 Kb de longitud. Las secuencias revelaron genes para transportadores, ácidos orgánicos y chaperonas que están íntimamente ligados a mecanismos de absorción, acumulación, destoxificación y tolerancia a metales pesados que en suma parecen proporcionarle a S. minima su capacidad para acumular y tolerar Pb. En conclusión, la técnica de la SSH permitió aislar e identificar genes Cuya expresión fue modulada por el Pb y participan en mecanismos De acumulación y tolerancia ante este metal en S. minima.