Mecanismos de regulación de la enzima fosfolipasa C de suspensiones celulares de Coffea arabica L. / Fernando García González

Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Bioquímica y Biología Molecular) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2012.

La fosfolipasa C (PLC) es una enzima localizada en mamíferos, plantas y otros organismos. Esta enzima lleva a cabo la hidrólisis del fosfatidil inositol 4,5 bisfosfato (PIP2), localizado en las membranas celulares, produciendo dos compuestos: 1) el inositol 1,4,5-trifosfato o IP3 que se une a receptores específicos localizados en organelos internos y estimula a los canales de calcio provocando la liberación y un aumento transitorio del calcio citosólico y 2) el diacilglicerol o DAG que puede activar a una proteína cinasa C o ser fosforilado a ácido fosfatídico por la acción de la DAGK. Estos compuestos per se actúan como segundos mensajeros, regulando procesos celulares, de ahí la importancia de estudiar esta enzima y de cómo puede regularse cuando es sometida a estrés salino y por metales. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de dos tipos de estrés (salino y por metales) sobre la enzima PLC en suspensiones celulares de Coffea arábica L. Se logró identificar una proteína putativa de aproximadamente 67 kDa en diferentes extractos proteicos celulares utilizando un anticuerpo policlonal que reconoce al sitio catalítico de la enzima; además se observó una relocalización de la proteína cuando las células se someten a diferentes tipos de estrés, así como cambios en la actividad de la enzima. Experimentos de amplificación por RACE, de los extremos terminales 5´ y 3´ sobre el ADNc obtenido de células de cafeto y combinaciones de iniciadores específicos para la PLC, diseñados sobre la secuencia del sitio catalítico de dicha enzima permitieron amplificar dos fragmentos, uno de 500 y otro de 1000 pb correspondiente a la amplificación del extremo 3´, el fragmento de 500 pb tiene una identidad del 98 por ciento con la región catalítica; por el contrario el de 1000 pb no guarda relación con alguna de las PLC reportadas. Respecto a la amplificación del extremo 5´ no se logró la amplificación de fragmentos.