Construcción del receptor quimérico BRI1::SERK1 y su uso para la transformación genética de tejidos de Coffea canephora L. /
Marfil Santana, Miguel David
Construcción del receptor quimérico BRI1::SERK1 y su uso para la transformación genética de tejidos de Coffea canephora L. / Miguel David Marfil Santana - xiv, 93 p. : il. ; 28 cm.
Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Bioquímica y Biología Molecular) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2012.
La embriogénesis somática, es un proceso que se produce con cierta asiduidad en la naturaleza, produciéndose de forma espontánea en más de 60 familias. Consiste en el desarrollo de embriones sin la fusión de gametos, produciendo una estructura bipolar (embrión) a partir de una célula somática. Los estadios de desarrollo de los embriones somáticos (globular, acorazonado y cotiledonario) tienen patrones fisiológicos similares a los estadios cigóticos, siendo muy probable que en ambos procesos ocurran los mismos eventos en los niveles molecular y bioquímico. Durante mucho tiempo se ha investigado la naturaleza de la señal que dispara la embriogénesis, con especial énfasis en la identificación de marcadores moleculares del inicio de este proceso. Uno de los genes cuya expresión marca las células competentes que darán lugar a embriones somáticos es el gen SERK1, que codifica una proteína perteneciente a la familia de receptores tipo cinasas (receptor-like kinases, RLK). SERK1 es considerado actualmente como el mejor marcador molecular de "competencia" embriogénica porque se expresa en células somáticas individuales, las cuales posteriormente se diferenciarán para dar lugar a las primeras estructuras embriogénicas. El hecho de que la sobreexpresión de SERK1 en tejidos de Arabidopsis thaliana incrementa la competencia embriogénica sugiere que su activación podría ser responsable o estar directamente relacionada con la diferenciación celular. No obstante, SERK1 es en la actualidad un receptor "huérfano", es decir no se conoce su ligando, por lo que es muy difícil identificar los eventos celulares involucrados en su señalización. Una alternativa para evidenciar los eventos celulares que ocurren cascada abajo del receptor SERK1 consiste en activar ectópicamente su dominio de cinasa mediante la fusión con el dominio de unión al ligando de un receptor para el que si se conoce el ligando. en el presente trabajo se implemento la estrategia anterior, diseñando in silico un receptor quimérico constituido por los dominios transmembranal y extracelular (de unión al ligando) del receptor de brasinoesteroides (BRI1) de Arabidopsis thaliana, y el dominio intracelular (con actividad de cinasa) del receptor SERK1 de Coffea canephora. La eficiencia de esta estrategia pudo ser corroborada al transformar exitosamente embriones somáticos de Coffea canephora con el receptor quimérico y demostrar su incorporación estable en el genoma sin que se observe algún cambió en el correcto desarrollo de la embriogénesis somática en los explantes de Coffea canephora; específicamente, el número de embriones presentados no se ve afectado por la transformación con el ADNc del receptor quimérico BRISERkl. En este trabajo no se evaluó la aplicación de brasinoesteroides para la activación del receptor quimérico BRISERKL
COFFEA CANEPHORA--CULTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
COFFEA CANEPHORA--EMBRIOGENESIS SOMATICA
COFFEA CANEPHORA--INVESTIGACIONES
Construcción del receptor quimérico BRI1::SERK1 y su uso para la transformación genética de tejidos de Coffea canephora L. / Miguel David Marfil Santana - xiv, 93 p. : il. ; 28 cm.
Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Bioquímica y Biología Molecular) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2012.
La embriogénesis somática, es un proceso que se produce con cierta asiduidad en la naturaleza, produciéndose de forma espontánea en más de 60 familias. Consiste en el desarrollo de embriones sin la fusión de gametos, produciendo una estructura bipolar (embrión) a partir de una célula somática. Los estadios de desarrollo de los embriones somáticos (globular, acorazonado y cotiledonario) tienen patrones fisiológicos similares a los estadios cigóticos, siendo muy probable que en ambos procesos ocurran los mismos eventos en los niveles molecular y bioquímico. Durante mucho tiempo se ha investigado la naturaleza de la señal que dispara la embriogénesis, con especial énfasis en la identificación de marcadores moleculares del inicio de este proceso. Uno de los genes cuya expresión marca las células competentes que darán lugar a embriones somáticos es el gen SERK1, que codifica una proteína perteneciente a la familia de receptores tipo cinasas (receptor-like kinases, RLK). SERK1 es considerado actualmente como el mejor marcador molecular de "competencia" embriogénica porque se expresa en células somáticas individuales, las cuales posteriormente se diferenciarán para dar lugar a las primeras estructuras embriogénicas. El hecho de que la sobreexpresión de SERK1 en tejidos de Arabidopsis thaliana incrementa la competencia embriogénica sugiere que su activación podría ser responsable o estar directamente relacionada con la diferenciación celular. No obstante, SERK1 es en la actualidad un receptor "huérfano", es decir no se conoce su ligando, por lo que es muy difícil identificar los eventos celulares involucrados en su señalización. Una alternativa para evidenciar los eventos celulares que ocurren cascada abajo del receptor SERK1 consiste en activar ectópicamente su dominio de cinasa mediante la fusión con el dominio de unión al ligando de un receptor para el que si se conoce el ligando. en el presente trabajo se implemento la estrategia anterior, diseñando in silico un receptor quimérico constituido por los dominios transmembranal y extracelular (de unión al ligando) del receptor de brasinoesteroides (BRI1) de Arabidopsis thaliana, y el dominio intracelular (con actividad de cinasa) del receptor SERK1 de Coffea canephora. La eficiencia de esta estrategia pudo ser corroborada al transformar exitosamente embriones somáticos de Coffea canephora con el receptor quimérico y demostrar su incorporación estable en el genoma sin que se observe algún cambió en el correcto desarrollo de la embriogénesis somática en los explantes de Coffea canephora; específicamente, el número de embriones presentados no se ve afectado por la transformación con el ADNc del receptor quimérico BRISERkl. En este trabajo no se evaluó la aplicación de brasinoesteroides para la activación del receptor quimérico BRISERKL
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