Papel de NPR1 en la interacción Nicotiana benthamiana - Euphorbia mosaic virus - Yucatán Península (euMV-YP): ^AV1 /
Us Camas, Rosa Yazmín
Papel de NPR1 en la interacción Nicotiana benthamiana - Euphorbia mosaic virus - Yucatán Península (euMV-YP): ^AV1 / Rosa Yazmín Us Camas - viii, 78 p. : il. ; 28 cm.
Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Bioquímica y Biología Molecular) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2013.
La proteína NPR1 (Non-expressor of pathogenesis-related gene 1) es un regulador maestro de la resistencia sistémica adquirida (SAR). A través de su interacción con los factores de transcripción del tipo TGA, permite la expresión de los genes de defensa o proteínas relacionadas a la patogénesis (PR) y así el mejoramiento de la resistencia (Dong, 2004). En el presente trabajo, se realizó el silenciamiento del gen NPR1 en plantas de Nicotiana benthamiana, empleando a un vector viral basado en el Euphorbia mosaic wras-Yucatán Península (EuMV-YP), denominado EuMV-YP:AAV1. Mediante el mecanismo de VIGS, se evaluó el efecto del silenciamiento de NPR1 en la generación de síntomas y el título viral en plantas de N. benthamiana. Los niveles de expresión de NPR1 fueron evaluados mediante PCR en tiempo real. En plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 se observó la inducción de la expresión de NPR1 a los 7, 14 y 21 dpi, al igual que en plantas inoculadas con el virus Silvestre EuMV-YP. En plantas inoculadas con el vector de silenciamiento de NPR1 (EuMV-YP:AAV1-NPR1), se observó una disminución significativa en el nivel de expresión de NPR1 a partir de los 14 dpi hasta los 21 dpi, alcanzando un máximo nivel de silenciamiento del 85 por ciento a los 21 dpi respecto a los niveles obtenidos en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1. A los 28 dpi se observó una disminución en el nivel de expresión de NPR1 en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1, EuMV-YP:AAV1-NPR1 y el virus silvestre EuMV-YP respecto a plantas sin inocular, que correlacionaba con una disminución en los niveles de severidad (de acuerdo a una escala de severidad establecida) y concentración viral cercanos encontrados entre las plantas con los difererentes tratamientos. Los niveles de concentración viral encontrados en plantas inoculadas con EuMV-YP:AAV1 y EuMV-YP:AAV1-NPR1 correspondían al 45 y 75 por ciento respectivamente de la concentración viral encontrada en plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP. A los 21 dpi las plantas inoculadas con la construcción EuMV-YP:AAV1-NPR1 alcanzaron su máximo nivel de severidad, por encima de plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1, las hojas nuevas presentaban deformaciones y enchinamiento con los bordes plegados hacia el interior y mosaicos amarillos que se extendían en toda la hoja, mientras que en plantas inoculadas con EuMV-YP:AAV1 las hojas presentaron ondulaciones con los bordes ligeramente plegados hacia el envés y mosaicos amarillos que se extendía parcialmente en la hoja. Las plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP presentaron los mismos síntomas que los observados en plantas inoculadas con el vector de silenciamiento de NPR1 a los 21 dpi. Estos resultados correlacionaron con una concentración viral 70 veces mayor en plantas inoculadas con EuMV-YP: AAV1-NPR1 con respecto a la concentración viral de plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 y, una concentración viral en plantas inoculadas con EuMV-YP:AAV1-NPR1 que corresponde al 80 por ciento de la concentración viral encontrada en plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP. El sistema vascular de las plantas es el medio por el cual los virus se mueven hasta los tejidos sanos. De esta forma, el movimiento de larga distancia y dependiente de floema juega un papel importante para una infección exitosa de virus en plantas (Carrington et al., 1996) por ello, el nivel de expresión de NPR1 y el título viral también fueron determinados en el tallo de plantas de N. benthamiana. Los resultados obtenidos indicaron una diminución en el nivel de expresión de NPR1 en plantas inoculadas con el vector EuMV-YP:AAV1-NPR1 del 55 por ciento con respecto al nivel de expresión en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 a los 21 dpi. La concentración viral en el tallo de plantas inoculadas con el vector de silenciamiento de NPR1 fue 3 veces mayor mayor a la obtenida en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 y representaba cerca de la mitad de la concentración alcanzada en plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP. Los resultados obtenidos indican que NPR1 participa en la interacción de tipo compatible entre plantas de N. benthamiana y el vector VIGS EuMV-YP:AAV1 generando síntomas menos severos e interviniendo en la reducción de la concentración del ADN viral.
PLANTAS--VIRUS
VIROSIS (PLANTAS)
VIRUS--INVESTIGACIONES
Papel de NPR1 en la interacción Nicotiana benthamiana - Euphorbia mosaic virus - Yucatán Península (euMV-YP): ^AV1 / Rosa Yazmín Us Camas - viii, 78 p. : il. ; 28 cm.
Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Bioquímica y Biología Molecular) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2013.
La proteína NPR1 (Non-expressor of pathogenesis-related gene 1) es un regulador maestro de la resistencia sistémica adquirida (SAR). A través de su interacción con los factores de transcripción del tipo TGA, permite la expresión de los genes de defensa o proteínas relacionadas a la patogénesis (PR) y así el mejoramiento de la resistencia (Dong, 2004). En el presente trabajo, se realizó el silenciamiento del gen NPR1 en plantas de Nicotiana benthamiana, empleando a un vector viral basado en el Euphorbia mosaic wras-Yucatán Península (EuMV-YP), denominado EuMV-YP:AAV1. Mediante el mecanismo de VIGS, se evaluó el efecto del silenciamiento de NPR1 en la generación de síntomas y el título viral en plantas de N. benthamiana. Los niveles de expresión de NPR1 fueron evaluados mediante PCR en tiempo real. En plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 se observó la inducción de la expresión de NPR1 a los 7, 14 y 21 dpi, al igual que en plantas inoculadas con el virus Silvestre EuMV-YP. En plantas inoculadas con el vector de silenciamiento de NPR1 (EuMV-YP:AAV1-NPR1), se observó una disminución significativa en el nivel de expresión de NPR1 a partir de los 14 dpi hasta los 21 dpi, alcanzando un máximo nivel de silenciamiento del 85 por ciento a los 21 dpi respecto a los niveles obtenidos en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1. A los 28 dpi se observó una disminución en el nivel de expresión de NPR1 en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1, EuMV-YP:AAV1-NPR1 y el virus silvestre EuMV-YP respecto a plantas sin inocular, que correlacionaba con una disminución en los niveles de severidad (de acuerdo a una escala de severidad establecida) y concentración viral cercanos encontrados entre las plantas con los difererentes tratamientos. Los niveles de concentración viral encontrados en plantas inoculadas con EuMV-YP:AAV1 y EuMV-YP:AAV1-NPR1 correspondían al 45 y 75 por ciento respectivamente de la concentración viral encontrada en plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP. A los 21 dpi las plantas inoculadas con la construcción EuMV-YP:AAV1-NPR1 alcanzaron su máximo nivel de severidad, por encima de plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1, las hojas nuevas presentaban deformaciones y enchinamiento con los bordes plegados hacia el interior y mosaicos amarillos que se extendían en toda la hoja, mientras que en plantas inoculadas con EuMV-YP:AAV1 las hojas presentaron ondulaciones con los bordes ligeramente plegados hacia el envés y mosaicos amarillos que se extendía parcialmente en la hoja. Las plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP presentaron los mismos síntomas que los observados en plantas inoculadas con el vector de silenciamiento de NPR1 a los 21 dpi. Estos resultados correlacionaron con una concentración viral 70 veces mayor en plantas inoculadas con EuMV-YP: AAV1-NPR1 con respecto a la concentración viral de plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 y, una concentración viral en plantas inoculadas con EuMV-YP:AAV1-NPR1 que corresponde al 80 por ciento de la concentración viral encontrada en plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP. El sistema vascular de las plantas es el medio por el cual los virus se mueven hasta los tejidos sanos. De esta forma, el movimiento de larga distancia y dependiente de floema juega un papel importante para una infección exitosa de virus en plantas (Carrington et al., 1996) por ello, el nivel de expresión de NPR1 y el título viral también fueron determinados en el tallo de plantas de N. benthamiana. Los resultados obtenidos indicaron una diminución en el nivel de expresión de NPR1 en plantas inoculadas con el vector EuMV-YP:AAV1-NPR1 del 55 por ciento con respecto al nivel de expresión en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 a los 21 dpi. La concentración viral en el tallo de plantas inoculadas con el vector de silenciamiento de NPR1 fue 3 veces mayor mayor a la obtenida en plantas inoculadas con el vector vacio EuMV-YP:AAV1 y representaba cerca de la mitad de la concentración alcanzada en plantas inoculadas con el virus silvestre EuMV-YP. Los resultados obtenidos indican que NPR1 participa en la interacción de tipo compatible entre plantas de N. benthamiana y el vector VIGS EuMV-YP:AAV1 generando síntomas menos severos e interviniendo en la reducción de la concentración del ADN viral.
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VIROSIS (PLANTAS)
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