Cultivo semicontinuo de suspensiones celulares de Coffea arabica var. Caturra / Lorena Isabel Vega Merino

Tesis (Maestría en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2001.

La embriogénesis somática es una metodología para la regeneración y propagación in Vitro de especies vegetales de interés. Permite reproducir plantas en forma masiva en cualquier época del año a partir de explantes de una planta seleccionada, aumentando su capacidad de multiplicación en menor tiempo que los métodos tradicionales. Para algunas especies, la embriogénesis somática se ha podido desarrollar en medio liquido, con la ventaja de poder mantener las suspensiones celulares en una fase de multiplicación, siendo posible inducir la embriogénesis en el momento requerido. Una de las características de las suspensiones celulares vegetales es la tendencia a la heterogeneidad en la morfología de su población celular. Las células de tipo meristemático, que son las que dan origen a los embriones, se encuentran en menor porcentaje. La proporción de los diferentes tipos de células depende de la composición del medio de cultivo, la edad de cultivo y de la especie. El objetivo principal de este trabajo fue obtener una suspensión celular de C. Arabica L, con el mayor porcentaje de agregados de células de tipo meristemático en la fase de multiplicación. Para lograrlo, se implementó un sistema de cultivo semicontinuo. Este tipo de cultivo parte de la suspensión es removida a intervalos establecidos y reemplazado por una cantidad equivalente de medio fresco a una velocidad constante. Con el objetivo de mantener constante el volumen del medio de cultivo en el reactor hay una salida de suspensión a la misma velocidad. La suspensión celular se caracterizó por estar constituida por 4 tipos de células, las cuales fueron clasificadas por su morfología. En un ciclo de cultivo por lotes en matraces con una duración de 14 días, el porcentaje inicial de células meristemáticas, llega a un máximo de 33 por ciento a los 8 días de cultivo. El establecimiento de un cultivo semicontinuo permitió obtener un máximo de 48 por ciento, a una velocidad de dilución constante de 0.0117h-1. El equipo diseñado para establecer el cultivo semicontinuo arrojó resultados satisfactorios. Permitió mantener la suspensión en condiciones estériles, se puede tomar muestra con bajo riesgo de contaminación, permite realizar cambios de los recipientes donde se encuentra el medio de cultivo y el de recuperación de la suspensión. El sistema es controlado por medio de un controlador lógico programable y la velocidad de dilución puede ser ajustada de acuerdo a las necesidades del cultivo. Posteriormente se realizó el cultivo semicontinuo con ciclos de cambio total del medio cada 48 horas. Se logró de esta manera un máximo de 93.3 por ciento de células de tipo meristemático a los 7 días de cultivo semicontinuo.