Caracterización bioquímica e histológica del desarrollo del embrion cigótico del cocotero (Cocos nucifera L.) / Ignacio Rodrígo Islas Flores

Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnologia de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 1998.

En la presente Investigación se analizó la posible existencia de proteínas fosforiladas en residuos de tirosina, en embriones cigóticos de cocotero en distintos estadios de desarrollo, con el objetivo de determinar si existe una correlación entre los cambios histológicos y la presencia de estas proteínas. Los estadios de desarrollo de los embriones se definieron adoptando el criterio arbitrario de asumir que la más reciente inflorescencia en ser polinizada corresponde al estadio cero. El estudio histológico permitió determinar que los embriones cigóticos de cocotero, hasta el estadio 10 de desarrollo, son de tipo circular y no muestran histodiferenciación. Entre los estadios 11 al 16, los embriones presentaron cambios importantes: a nivel histológico, se observó el inicio de la histodiferenciación de tejidos, tales como la formación de la plúmula, los cotiledones, la radícula y el haustorio. A nivel morfológico, los embriones incrementaron su longitud, cambiaron de una forma circular a forma de torpedo e incrementaron su peso fresco, hasta alcanzar masas cercanas a 100 miligramos. A nivel bioquímico, los embriones presentaron cambios en el patrón de proteínas totales, y en particular, una proteína de 47 kDa incrementó su concentración a partir del estadio 12 de desarrollo. El patrón de fosforilación, con [32P]y-ATP, en los extractos solubles de los embriones mostró, que entre los estadios de desarrollo 10 al 12 las cinasas parecen ser más activas, debido a que en estos estadios la señal detectada en la autoradiografía fue abundante. En contraste, en los estadios 13 a 16 la señal obtenida fue menor. La inmunodetección con anticuerpos monoclonales contra fosfotirosina, en las proteínas solubles de los embriones de cocotero, mostró un patrón de fosforilación de tipo dinámico, presentando cambios dependientes de la madurez de los embriones analizados. Los extractos correspondientes a los estadios de desarrollo 10-12 presentaron bandas con masas moleculares de 175, 151, 125 y 108 kDa, las cuales estuvieron ausentes en los estadios posteriores (13 a 16). En contraste, en los extractos de los estadios de desarrollo 13 a 16 se inmunodetectaron proteínas con masas moleculares de 31 y 24 kDa, exclusivas de estos estadios. La utilización del sustrato específico RR-SRC, cuya secuencia de aminoácidos es RRLIEDAE[Y}AARG, y posee un sitio único de fosforilación en tirosina mostró una mayor actividad de este tipo de cinasas en los extractos de los estadios 10a12y15a16.La ¡nmunolocalización de las proteínas fosforiladas en tirosina en los embriones cigóticos mostró una señal localizada en el citosol, lo cual coincidió con los resultados de la inmunodetección. La aplicación de un tratamiento con KOH 1 M mostró que al final del mismo, proteínas con masas moleculares de 175, 125, 62, 44, 41, 37 y 33 kDa permanecieron con [32P] incorporado, lo cual apoyó la presencia de fosforilación en tirosina en estas proteínas. De igual forma, un tratamiento con fosfatasa alcalina a las proteínas fosforiladas de los embriones y su posterior inmunodetección con el anticuerpo monoclonal contra fosfotirosina, mostró que en bandas con masas moleculares de 172 (~175), 151, 125, 108, 51, 44, 41 y 24 kDa la señal de fosforilación desapareció o disminuyó, lo cual constituyó otra evidencia en favor de la presencia de proteínas fosforiladas en tirosina.