Transformación genética de achiote (Bixa orellana L.) vía Agrobacterium tumefaciens con el pCAMBIA 2301 / Horacio Salomón Ballina Gómez

Tesis (L.B.) .-- Instituto Tecnológico Agropecuario No. 2, 2002.

El achiote (Bixa orellana L.) es un cultivo económicamente importante ya que contiene la bixina, un pigmento usado en la industria alimenticia y medicinal. Su mejoramiento genético por cruzamiento tradicional está restringido por su heterogeneidad y lento crecimiento, por lo cual una alternativa es la transformación vía Agrobacterium tumefaciens. En este trabajo se inocularon explantes de hipocotilos de achiote con tres cepas de A. tumefaciens; EHA105 (Succinamopina), LBA4404 (Octopina) yC58C1 (Napalina) transformadas con el plásmido CAMBIA 2301 conteniendo el gen uidA (GUS) con un intrón para su expresión en células eucarióticas (vegetales). Durante el proceso de transformación se encaminó la influencia de AgNO3 en la transparencia del ADN-T a las células vegetales mediante cuatro tratamientos a los 3 y 12 días. El tratamiento 2 (AgNO3 en medio de germinación) (1328 puntos azules/explante) a los 3 días y el tratamiento 3 (AgNO3 en medios de inección, cocultivo e inducción de brotes) (1072 puntos azules/explante) a los 12 días, mostraron la actividad más alta de GUS. Estos resultados sugieren que el AgNO3 incrementa la transferencia del ADN-T a las células de achiote a los 3 días cuando se encuentra en el medio de germinación. Y a los 12 días cuando se encuetra únicamente en los medios de infección, cocultivo e inducción de brotes. Por el contrario si el AgNO3 es usado en todos los medios, se inhibe la transferencia del ADN-Y. La mayor actividad de GUS se observó en las cepas EHA105 y LBA4404. Seleccionándose LBA4404 (octopina) debido a su fácil eliminación con el antibiótico cefotaxima en el medio de inducción de brotes. Por lo que se sugiere LBA4404 como la cepa más adecuada para la transformación del achiote.