Optimización del protocolo de transformación genética de microtomate (Lycopersicon esculentum Mill) vía Agrobacterium tumefaciens / Julio César Canto Martín

Tesis (L.B.) .-- UADY. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, 2003.

En el presente estudio se inocularon explantes de hoja cotiledonaria de microtomate con la cepa EHA 105 de Agrobacterium tumefaciens transformada con el plásmido CAMBIA 2301, el cual contiene el gen uidA (GUS) con un intrón. Se evaluó el efecto de la combinación de dos factores: tiempo de inoculación (infección) y tiempo de cocultivo, en la transformación de los explantes de microtomate utilizando 16 tratamientos. De acuerdo a una Anova para un diseño bifactorial, los diferentes tiempos de inoculación tuvieron un efecto significativo en la expresión de GUS en los brotes (P menor que0.01), al igual que los tiempos de incubación en cocultivo (P menor que0.01). Sin embargo, la interacción de los dos factores no tuvo un efecto significativo en la expresión de GUS (P mayor que 0.05). En la prueba de comparación múltiple de Duncan, los tiempos de inoculación que mejor resultado dieron fueron los de 30 y 40 min y los mejores tiempos de cocultivo fueron de 24 y 48 h (P menor que0.05), lo que nos sugiere que un incremento en estos tiempos aumenta la eficiencia de la transformación. Dado que la interacción no fue significativa, se tomaron las frecuencias de transformación, donde el tratamiento P, de 40 minutos de inoculación y 48 horas de cocultivo, tuvo el valor más alto de transformación (59.1 por ciento). Al evaluar posteriormente el protocolo, utilizando el tratamiento P, se obtuvo una frecuencia de regeneración de brotes de un 87.1 por ciento y una frecuencia de transformación de hasta 67.4 por ciento. Los resultados obtenidos en el presente trabajo indican que se obtuvo un protocolo de transformación genética vía A. tumefaciens eficiente y reproducible para microtomate.