Construcción de una biblioteca genómica de Mycosphaerella fijiensis utilizando el vector tipo cromosoma bacteriano artificial / Diana Karina Guillén Maldonado

Tesis (Maestría en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2004.

El plátano y el banano son de los principales productos agrícolas de exportación en México; se cuenta con una superficie de aproximadamente 70 mil hectáreas dedicadas a este cultivo. En la actualidad, la industria platanera en México, así como en América Central, Sudamérica y algunas islas del Caribe es afectada notablemente por un hongo patógeno que ocasiona la enfermedad denominada Sigatoka negra, la cual es una seria amenaza para la economía de los países productores. Esta enfermedad, altamente destructiva en los principales cultivares de plátano, puede ocasionar pérdidas en rendimiento de un 50 por ciento a un 100 por ciento . Hoy en día, el combate químico es la alternativa más usada para hacerle frente. Sin embargo, esta opción trae problemas colaterales, como contaminación ambiental, daños a la salud humana y aparición de resistencia del hongo causal a los funguicidas. Por estas razones, es prioritaria la búsqueda de nuevas alternativas de manejo de la Sigatoka negra (control cultural, biológico, mecánico y genético) que permitan reducir hasta donde sea posible el uso de agroquímicos (Orozco, 1998b). A la fecha no se han realizado estudios del hongo desde el punto de vista genético. Mediante técnicas de biología molecular e ingeniería genética podemos estudiar con mas profundidad al causante de esta enfermedad. Una herramienta útil para este propósito es la construcción de una biblioteca genómica. Este trabajo tiene el objetivo de clonar fragmentos de ADN genómico del hongo en el vector tipo cromosoma bacteriano artificial (BAC) para establecer una biblioteca genómica de Mycosphaerella fijiensis. Se aisló ADN de alto peso molecular a partir de micelio de hongo, el ADN fue parcialmente digerido con la enzima de restricción Hind 111, sujeto a una doble selección, electroeluido y clonado en el vector pCC1 BAC (Epicentre). La biblioteca obtenida contiene 1 920 clonas con un tamaño promedio de inserto de 90 kb. Esta representado el genoma 6 veces considerando que el tamaño genómico mínimo es de 28 Mb, teóricamente existe el 99 por ciento de probabilidad que se encuentre alguna secuencia. Si embargo, si el tamaño genómico es de 40 Mb, entonces esta representado 4 veces el genoma. Las clonas fueron almacenadas en placas de 384 pozos a -800 C, con dos copias de la biblioteca, se prepararon cinco membranas de nylon en donde se fijó el ADN para futuras hibridaciones.