Obtención de fragmentos de ADN correspondiente a genes de transportadores ABC de Mycosphaerella fijiensis / Linnette Yalile Chablé Pech

Tesis (L.B.) .-- Instituto Tecnológico Agropecuario de Conkal, Yucatán, 2005.

La Sigatoka negra es una enfermedad que afecta a los plátanos y bananos de todo el mundo, y ésta es producida por el hongo asmiceto Mycosphaerella fijiensis (Morelet). Este hongo se caracteriza por producir muerte del tejido foliar durante el desarrollo de la enfermedad y en consecuencia disminuye la capacidad fotosintética de la hoja, además ocasiona madurez prematura de los frutos y por consecuencia las pérdidas pueden alcanzar hasta el 50 por ciento de la producción total. Es importante comprender los procesos que se desarrollan a nivel molecular en este hongo y conocer que genes participan durante las etapas de infección y establecimiento. Un grupo de genes que codifican para proteínas y que están involucrados en estos procesos (infección y establecimiento), son los denominados transportadores ABC. En el presente estudio se realizaron subcultivos del hongo Mycosphaerella fijiensis línea "Veracruz", se extrajo el ADN genómico y se efectuaron pruebas con la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa empleando "primers" degenerados hasta estandarizar la PCR, los fragmentos obtenidos, se clonaron en el vector TOPO-TA. Posteriormente a cada clona se le extrajo el plasmido, se purificó y se envió a secuenciar. Por otra parte se realizó un escrutinio de la biblioteca genómica BAC y en el ADN g de Mycosphaerella fijiensis para ubicar las clonas positivas en el genoma de dicho hongo. Una vez ubicadas se cultivaron en medio líquido Luria Broth y se les extrajo el plásmido, se dirigieron con enzimas de restricción y se inmovilizaron en membranas de nylon para se hibridadas. La secuenciación de las clonas obtenidas indicó que se tratan de tres potenciales fragmentos de transportadores ABC. Los resultados obtenidos pueden servir de base para clonar los genes de interés o fragmentos más grandes que los obtenidos en el presente trabajo.