Efecto del homobrasinólido en la expresión del gen CDKA en explantes cultivados in vitro de Cocos nucifera L. / José Francisco Rodríguez Paredes

Tesis (Maestría en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2005.

La creciente demanda de palmas de cocotero resistentes a enfermedades requiere de la multiplicación masiva de palmas mejoradas o seleccionadas. Esta situación puede ser resuelta con la micropropagación. Se ha reportado un protocolo reproducible de regeneración vía embriogénesis somática a partir de explantes de plúmula, pero su eficiencia es aún baja. El protocolo está basado en el uso de una auxina para inducir la formación de callo embriogénico. Ya que se sabe que los BRs actúan sinergisticamente con las auxinas y podrían estar involucrados en el control de la embriogénesis vegetal, se probó el efecto del HBR en el desarrollo de callo inicial, callo embriogénico y la formación de embriones somáticos en explantes de plúmula con resultados positivos. Sin embargo, poco se sabe acerca del modo de acción de los BRs. El objetivo de este trabajo fue estudiar si el efecto estimulatorio del HBR sobre la formación de callo embriogénico y de embriones somáticos está asociado con un incremento en la expresión del gen COKA, clave en el control de los eventos del ciclo celular. Se establecieron tres experimentos usando como explantes, plúmulas y estructuras embriogénicas globulares. Los explantes fueron expuestos a tres concentraciones de HBR (durante 3 d de pre-cultivo 0.01, 0.1 Y 1.0 ~M). Los explantes respondieron favorablemente a los BRs incrementando su capacidad de formar callo embriogénico y embriones somáticos. Se determinó la expresión de COK A mediante la técnica de RT -PCR cuantitativo; se utilizaron iniciadores del gen 188 como normalizador. Los resultados mostraron que el HBR incrementó v hasta ocho veces la expresión del gen CDKA respecto al control en callos embriogénicos procedentes de plúmula. Los callos no embriogénicos mostraron una disminución en la expresión de CDKA aún en presencia del HBR. Por otra parte, se estableció un protocolo de hibridación in situ para la detección de las células que expresan este gen. Muchos resultados indican la presencia de ruido de fondo, otros mostraron un patrón regular de la expresión de CDKA aportando evidencias de un proceso morfogénico ordenado.