Aspectos bioquímicos y moleculares en el inicio de la embriogénesis somática en Coffea canephora / Hernán de Jesús Villanueva Alonzo

Tesis (Maestría en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2006.

La embriogénesis somática (ES) es el proceso mediante el cual las células somáticas se desarrollan para producir un embrión, cuyo origen puede ser unicelular o pluricelular. Los primeros estadios de desarrollo de los embriones somáticos (globular, acorazonado y cotiledonario) tienen patrones fisiológicos similares a los estadios cigóticos. Así, la ES constituye una importante herramienta experimental para el estudio del proceso embriogénico, que además tiene la ventaja de no contar con barreras naturales como el endospermo. El presente trabajo tuvo como objetivo principal el determinar si existen cambios en los niveles de activación de las proteínas cinasas activadas por mitógenos durante el inicio y el desarrollo de la embriogénesis somática de Coffea canephora, a partir de explantes de hoja. Se clonó y monitoreó la expresión del gen SERK, el cual codifica una cinasa tipo receptor específica del proceso embriogénico y que ha sido aceptada como el marcador molecular más preciso del inicio de la embriogénesis somática. Mediante el monitoreo de los niveles de transcrito de SERK de C. canephora se determinó que la transición embriogénica debe ocurrir alrededor de los 5 días en cultivo. Nosotros determinamos, mediante inmunoblot, la presencia de varias bandas de MAPK activadas de diferentes intensidades; de especial interés fue una banda de -48 kDa, la cual presentó un nivel basal al inicio del experimento, pero que para el día 5 ya tenía un nivel considerablemente alto. Este nivel de activación tuvo un máximo entre los 5 y los 10 DIC, retornando a los niveles basa les entre los días 20 y 25 de cultivo, manteniéndose así al menos hasta el día 30. Los resultados anteriores demuestran que efectivamente las MAPK presentan una activación diferencial a lo largo del proceso embriogénico de C. canephora, en etapas coincidentes con el establecimiento del inicio molecular del proceso. Lo anterior sugiere que estas enzimas podrían ser consideradas como excelentes candidatos para participar en la regulación del proceso.