Factor transcripcional E2F: en procesos de diferenciación y apoptosis en cultivos de Coffea canephora / Juan Gualberto Collí Mull

Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2007.

El factor transcripcional E2F fue identificado originalmente por activar, a nivel transcripcional, el promotor viral E2 de las proteínas oncogénicas E1A. A nivel de sistemas eucarióticos, posteriormente se demostró que controla la transcripción de genes requeridos para la regulación del ciclo celular. Miembros de la familia de E2f han sido identificados en diferentes especies de plantas; el mecanismo de acción de E2F en la regulación de crecimiento, diferenciación, muerte celular y desarrollo permanece desconocido. Para analizar la posible participación de E2F durante la muerte celular programada, se estableció un sistema biológico como son las suspensiones celulares de Coffea canephora. Se experimentó con diferentes tratamientos como son: a) la eliminación de la auxina 2, 4-0 en el medio de cultivo, b) la adición de un medio de cultivo obtenido a partir de suspensiones celulares sometidas a muerte celular, c) la exposición a luz ultravioleta y d) la combinación de la eliminación de la auxina 2,4-0 y la adición del medio de la cultivo de las suspensiones celulares muertas. Las suspensiones celulares mantenidas en el medio sin 2,4-0 disminuyeron su crecimiento hasta 80 por ciento (PF) comparado con el testigo, no obstante este comportamiento fue acompañado por un cambio en la apariencia de las células cuando se adicionó el medio de las suspensiones celulares muertas a las suspensiones mantenidas sin 2,4-0. El tratamiento con luz UV fue capaz de inhibir completamente el crecimiento de las suspensiones celulares durante el ciclo de cultivo. De igual manera se observó daño en el AON y ruptura de la membrana nuclear de las células en el tratamiento sin 2,4-0 y en la combinación del medio de cultivo de las células muertas y la ausencia de 2,4-0. Finalmente, los niveles de E2F se mantuvieron constantes cuando se eliminó el 2,4-0. Sin embargo, se observó una disminución de E2F cuando a las suspensiones celulares mantenidas sin 2,4-0 se les agregó el medio de las suspensiones celulares muertas. Estos resultados sugieren que el medio de cultivo de las suspensiones celulares muertas es capaz de inducir una muerte celular por necrosis dependiente de la ausencia de 2,4-D, la cual se acompaña por una disminución de la presencia de E2F. Por otra parte, la regulación de la transcripción depende de un apropiado control de las señales positivas y negativas para la expresión de los genes que participan en la regulación de la maquinaria transcripcional y los diferentes complejos proteicos. NC2, fue purificado inicialmente de los extractos de células en humanos con una actividad que inhibe la transcripción basal de promotores TATA, y se define como un represor general de la transcripción. Sin embargo, se ha descrito que NC2 puede llevar a cabo diferentes funciones in vivo e in vitro. Nuestros experimentos muestran claramente que algunos miembros del complejo Mediador/SRB tales como MED23, MED21 Y MED7, coprecipitan selectivamente con NC2 y no con los factores generales de la transcripción (TFIIB, TFIIH). Por otra parte las reacciones de transcripción in vitro con los extractos con NC2 abatido; ocasionaron una disminución de la transcripción alrededor del 89 por ciento comparado con otras fracciones cromatográficas o NC2 recombinante. Finalmente, al utilizar una columna de filtración en gel, logramos observar una interacción física entre MED21 y NC2. Estos datos sugieren que la interacción de NC2 y MED21 ayuda a modular los nivele de transcripción por el complejo mediador/SRS.