Actividad del factor transcripcional NC2 en Oryza sativa L. / Diana Karina Guillén Maldonado

Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2007.

El principal punto de regulación para la mayoría de los genes se da al inicio de la transcripción. Para realizar este proceso se requiere que las proteínas reguladoras se unan al ADN tanto en el promotor como cercano a él, lo cual ocasiona un aumento o disminución de la afinidad de la ARN polimerasa al ADN para comenzar la transcripción. Estas proteínas incluyen represores, activadores, y factores generales de transcripción. Un regulador que modula la iniciación de la transcripción por interacción directa con componentes de la maquinaria general de transcripción es NC2 (cofactor negativo 2). NC2 es un represor de la transcripción de clase II enlazándose a TBP (proteína de unión a TATA) e inhibiendo la asociación de los factores transcripcionales generales TFIIB y TIIFA con el complejo promotor- TBP (complejo de pre-iniciación), consiste de dos subunidades llamadas NC2a/DRAP1 (22 kDa) y NC2~ (20 kDa) este último identificado como Dr1, ambas conservadas entre eucariotes y esenciales para Saccharomyces cerevisiae. Hasta el momento se ha estudiado el comportamiento de NC2 en levadura, humano y Drosophila y se ha observado que existen diferencias en su función represora dependiendo del organismo y del promotor del gen a regular. Por lo cual este trabajo sienta las bases para estudiar la función reguladora de NC2 en plantas (Oryza saliva), tanto en promotores denominados TATA como TATA-less. En este trabajo se identificó la presencia de NC2 en diferentes tejidos (hoja y tallo) de Oryza saliva, siendo de un tamaño aproximado de 19 kDa. Se expresó y purificó de forma combinada las subunidades NC2 alfa y NC2 beta, implementando un sistema de doble expresión y purificación simultánea de NC2 como heterodímero, permitiendo obtener un complejo activo. Además se determinó que NC2 tuvo una interacción directa con un Mediador (Med21) que forma parte del complejo SRB/Mediador, lo que permitió observar que NC2 se une a otro tipo de proteínas y no solo a los factores transcripcionales generales. Se ligaron las secuencias de los promotores TATA Y T A T A-less de Oryza saliva en vectores de clonación para su posterior estudio. Perteneciendo la secuencia del promotor TATA a un gen (Iip 19) relacionado con el estrés a baja temperatura y el promotor TATA less siendo de un gen respectivo a la fosfofolipasa D, implicado en casos de regulación celular, metabolismo de lípidos entre otros.