Estudio del comportamiento de las proteínas cinasas activadas por mitógenos de callos de Cocos nucifera L. expuestos a quitosano / Iván Alfredo Estrada Mota

Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2008.

La palma de cocotero (Cocos nucifera L.) es una especie tropical ecológica y económicamente importante. Esta palma es atacada por patógenos de diversa naturaleza, como son virus, viroides, hongos, protozoarios, nematodos y mollicutes. Dada su naturaleza epidémica, el Amarillamiento Letal (AL) es la enfermedad más seria que afecta a esta especie en América Central, el Caribe y África. El AL es una I enfermedad devastadora restringida al floema y provocada por un fitoplasma. Aunque hay muchos estudios epidemiológicos para esta y otras enfermedades que afectan a la palma, la fisiología de la interacción cocotero-patógeno a nivel bioquímico y molecular ha sido poco estudiada y por lo tanto, es poco comprendida. La modificación covalente de proteínas por fosforilación/desfosforilación es, probablemente, el mecanismo de transducción de señales más importante tras la percepción de estímulos extracelulares. Esta actividad la llevan a cabo Proteínas Cinasas Activadas por Mitógenos (MAP cinasas), enzimas que constituyen una vía De comunicación intracelular conservada en eucariotes. La participación de la vía de las MAP cinasas después de la percepción de! estrés biótico y abiótico ha sido demostrada en diversos modelos y especies vegetales de importancia económica. En el presente trabajo de investigación, se decidió evaluar si la presencia de un inductor de origen fúngico activa a las MAP cinasas de cocotero, con el objetivo de obtener una mejor comprensión de la interacción cocotero-patógeno. Mediante un modelo de inducción de las respuestas de defensa, que consistió en el reto de callos de cocotero con el inductor de origen fúngico quitosano, se evaluó la respuesta de las MAP cinasas a nivel transcripcional y postraduccional. Mediante ensayos de cinasa en gel, inmunodetección e inmunoprecipitación, se determinó que una posible MAP cinasa de -46 kDa se activa en respuesta a la presencia del inductor. Esta evidencia sugiere que esta cinasa podría participar en la transducción de la señal después de la percepción del inductor. Por otra parte, utilizando ensayos de RT -PCR con cebadores degenerados diseñados a partir de regiones conservadas de MAP cinasas, se clonaron secuencias de ADNc de MAP cinasas de callo de cocotero, correspondientes a la región catalítica. Asimismo, ensayos de tipo RACE permitieron clonar secuencias de ADNc de genes de MAP cinasas de hoja de cocotero que corresponden a sus extremos 5´ y 3´. Utilizando estas secuencias como sondas se determinó, mediante ensayos de expresión, que bajo las condiciones en las que se realizó el experimento, no se observaron cambios en la población de los ARN mensajeros correspondientes a MAP cinasas de cocotero como respuesta al tratamiento con el quitosano. Esto sugiere que uno de los niveles de regulación de la MAP cinasa que está involucrada en la señalización ante el inductor es el postraduccional.