Elaboración de una construcción génica usando el promotor y región 5´ no traducible del gen tufA del cloroplasto de la microalga verde Chlamydomonas reinhardtii / Anayeli Guadalupe Beltrán Aguilar

Tesis (I.B.) .-- Instituto Tecnológico de Mérida, 2010.

Al entrar en el nuevo milenio, la demanda mundial de proteínas recombinantes ha aumentado de manera significativa. Las proteínas recombinantes incluyen vacunas, anticuerpos, proteínas terapéuticas y de uso industrial. Lo anterior ha impulsado la búsqueda de nuevos sistemas de expresión más rentables y eficientes que los sistemas tradicionales de bacterias, levaduras y cultivos celulares de mamíferos. Por ejemplo, la microalga verde eucariota Chlamydonomas reinhardtii ha sido reconocida por su potencial como plataforma para la expresión de proteínas recombinantes a gran escala debido a su cultivo fácil y económico así como su tasa de crecimiento rápido y su manipulación por ingeniería genética. Diversos estudios previos han demostrado que la expresión de un gen varía dependiendo de la combinación del promotor y la región no traducible (UTR) que se utilice. Por lo tanto, es importante la búsqueda de nuevas combinaciones que favorezcan e incrementen esta expresión y así contar con una gama de secuencias reguladoras para expresar genes de interés comercial. En este trabajo se realizó la caracterización in silico de la reguladora del promotor más 5´UTR del gen tufA. Además, se empleó esta secuencia promotora para elaborar una construcción génica con el gen reportero luxCt y 3´UTR de rbcL que servirá posteriormente para la transformación del genoma del cloroplasto de C. reinhardtii. Por otro lado, se estableció el análisis por PCR para la identificación de clonas trasplastómicas y homoplásmicas de C. reinhardtii.