Determinación de la actividad enzimática de pirofosfatasa en plántulas de cafeto cultivadas in vitro / Luis Fernando Aguilar Caamal

Tesis (I.B.) .-- Instituto Tecnológico Superior del Sur del Estado de Yucatán, 2010.

Los tejidos en desarrollo consumen una gran cantidad de energía en forma de ATP, al mismo tiempo se producen subproductos de desecho en las células, especialmente en los organelos como la vacuola donde se encuentran dos tipos de enzimas que traslocan protones a su interior, la ATPasa la cual su sustrato principal es el A TP y la H+-PPasas cuyo sustrato es el PPi. Las enzimas encargadas de hidrolizar el pirofosfato celular, regenerando así fósforo inorgánico (Pi), son laspirofosfatasas inorgánicas y pueden dividirse en 2 grandes grupos: las pirofosfatasas solubles y las pirofosfatasas traslocadoras de protones, englobadas bajo la misma identificación EC 3.6.1.1 (Rea y Poole, 1993). La PPasa traslocadora de protón (H+-PPasa o V-PPasa) es una proteína integral de membrana, posee las siguientes tres características; primera consiste en un único polipéptido de 80 k Da, segunda la enzima utiliza un sustrato de bajo costo (PPi) que utiliza la energía liberada por hidrólisis del PPi, tercera coexiste con la A TPasa en el tonoplasto. Las H+-PPasas pueden ser encontradas en organismos procariotas y eucariotas. Por otra parte se han encontrado dos isoformas existentes en Arabidopsis la AVP1 que son dependientes de potasio y AVP2 que son independientes de potasio ambas formas parecen expresarse en raíz, tallo y hojas, la A VP1 esta asociada al tonoplasto y AVP2 asociada al aparato de Golgi. Las H+-PPasas pueden otorgar resistencias a estrés abiótico como salinidad y sequía. También se han estudiado la regulación de la H+-PPasa en presencia de otros iones tales como el K+ y el CI- en raíces de centeno (Seca/e cerea/e). Un mecanismo similar parece estar involucrado en la regulación de H+-PPasa en condiciones de frio. En base a que todas las H+-PPasas conocidas presentan actividad in vitro se propuso como modelo de trabajo plántulas de café cultivadas in vitro, de las cuales, hasta ahora no existen reportes de actividad de H+-PPasa. Durante el desarrollo de este trabajo se pudo establecer un protocolo para la medición de la actividad en café y así como su caracterización.