Estrategias para la transformación genética de Argemone mexicana L / Nasib Hiram Blancarte Jasso

Tesis (L.B.) .-- Instituto Tecnológico de Conkal, 2011.

Argemone mexicana (Papaveraceae) se ha utilizado en la medicina tradicional por largo tiempo. Los efectos de esta planta posiblemente se deban a los alcaloides tipo bencilisoquinolínicos que produce y que causan diversos efectos fisiológicos. Los estudios realizados en esta especie son escasos y esto puede deberse, a la limitada disponibilidad de material vegetal, ya que se considera una planta silvestre. Este trabajo representa uno de los primeros estudios sobre el empleo de técnicas de cultivo de tejidos y de estrategias de transformación gen ética con Agrobacterium en esta planta. En este trabajo, se utilizaron cepas de A. tumefaciens y A. rhizogenes, para desarrollar métodos de transformación. Como explantes se probaron raíces, hojas y tallos obtenidos a partir de plántulas in vitro. El contenido de alcaloides (berberina y sanguinarina) se analizó por densitometría, después de una separación por cromatografía en capa fina, tanto en los tejidos transformados como en no transformados (testigos). Con el fin de evaluar el efecto que la transformación puede tener en la producción de alcaloides, se utilizaron diferentes tipos de cultivos in vitro como el cultivo de callos desdiferenciados, brotes y raíces normales. Para la inducción de este cultivo, raíces de plántulas in vitro se escindieron y se mantuvieron en presencia de 5.7 I.JM de ácido indolacético (AlA). Los resultados indican que el proceso de transformación per se sí ocasionó cambios en el contenido de alcaloides, ya que, en comparación con los brotes normales, los brotes acumularon menores niveles de sanguinarina, pero mayores de berberina. De este alcaloide sólo se observaron cantidades traza en los brotes no transformados. De este modo, para el empleo de estas estrategias con el fin de modificar el contenido de alcaloides en A. mexicana se debe considerar que algunos efectos pueden no ser el resultado de la introducción del nuevo gen, sino del proceso de infección por sí mismo. Por ello, la inclusión de controles experimentales para evaluar estos efectos es necesaria.