Morfogénesis in vitro y transformación transitoria de Phalaenopsis zuma´s pixie / Blanca Estela Moreno Lara

Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Biotecnología) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2011.

e desarrolló un protocolo de morfogénesis in vitro para la orquídea comercial de Phalaenopsis zuma´s pixie. Los factores evaluados fueron dos diferentes citocininas; thidiazuron (TDZ) y 6-Bencilaminopurina (BAP) ambas con las siguientes concentraciones 2.5, 5.0, 10.0´ 12.5 ~M. Los explantes consistieron en tejido foliar dividido en parte basal, media y apical, en medio Murashigue y Skoog (MS) a la mitad de la concentración de las sales, suplementado con vitaminas. Los resultados en la inducción a embriogénesis somática se observó que el medio MS suplementado con 5 y 10 ~M de TDZ mostraron un 100 por ciento de explantes con respuesta, sin embargo en la cantidad de embriones somáticos por explante, la parte apical mostro siempre una respuesta mayor que las otras secciones de la hoja, la concentración de 10 ~M de TDZ resulto con un mayor número siendo 8.3 embriones somáticos por explante. En la inducción de embriogénesis somática con BAP fue casi nula, por lo cual no se toma en consideración. La organogénesis se observó en presencia de BAP en el medio MS, esta presento al igual que con TDZ, la mayor respuesta en la zona apical de la hoja, dando el 100 por ciento de los explantes brotes la concentración de 10 ~M de BAP, presento 5.6 brotes por explantes en la zona apical, mientras que en presencia de 2.5 y 12.5 ~M de BAP, la producción de brotes fue mínima. En el caso de transformación gen ética vía Agrobacterium tumefaciens se tomaron explantes de hoja, brotes y embriones somáticos, los explantes fueron co-cultivados 3 días en oscuridad con la cepa LBA4404 de A. tumefaciens que contenía el plásmido pCAMBIA 1305.1, con dos concentraciones diferentes 0.2 y 0.5 DO600nm, posteriormente se eliminó el exceso de bacteria con cefatoxima 100mg/L, y se dejaron incubando en medio MS Murashige y Skoog, se tomaron 30 explantes a los 5, 10 y 15 días, el tratamiento número dos (concentración bacteriana de 0.2 DO600nm y papel filtro) presento una mayor eficiencia de transformación en los explantes de callo y foliar, mientras que para los embriones somáticos se observó que con una concentración bacteriana de 0.5 DO600nm y sin papel filtro.