Polimorfismo de transcritos en la embriogénesis somática de Musa cv. AAA, mediante cDNA-SRAP / Jorge Manuel Itzá Can

Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Bioquímica y Biología Molecular) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2011.

Antecedentes: El banano es uno de los cultivos de frutales más importantes del mundo. El mejoramiento convencional en las variedades comerciales es limitado por su frecuente esterilidad y poliploidía. Por lo tanto, la embriogénesis somática es un prerrequisito para su mejoramiento mediante el uso de herramientas biotecnológicas. Los callos embriogénicos pueden inducirse utilizando el sistema de las flores masculinas inmaduras en cultivares triploides de banano, Musa acuminata, cv. Gran Naine, y cv., Williams, con el genoma AM, y utilizando embriones cigóticos inmaduros de semillas de plantas diploides, de Musa acuminata ssp., ma/accensis, AA, tipo Selangor, sin embargo, los embriones diferenciados del primer sistema, a menudo muestran un reducido porcentaje de germinación 35-45 por ciento, contrario al observado en el segundo sistema que presenta un 90-95 por ciento de germinación. El análisis de expresión genómica-global es una herramienta importante para el descubrimiento de genes implicados en procesos celulares y de desarrollo, en particular, para la comparación de la embriogénesis cigóticos v s somática en una planta no-modelo. En este trabajo se analizó el polimorfismo de transcritos de genes que se expresan en estadios específicos de la embriogénesis de Musa spp. Para ello, se desarrolló la metodología de cONA-SRAP, basada en la amplificación de secuencias relacionadas polimórficas (Sequence Releated Amplified Polymorphysm, SRAP) a partir de ácido desoxirribonucleico complementario (cONA). El RNA total fue aislado a partir de callos embriogénicos (CE), CE con presencia de pro-embriones globulares, embriones somáticos maduros, y tejidos de hoja jóvenes, de los genotipos triploides MA y diploides M, junto con embriones cigóticos maduros. El seguimiento de patrones cONA-SRAP, comparó tres etapas específicas de la embriogénesis somática de los genotipos mencionados y los embriones cigóticos de las especies diploides, frente a tejidos de las hojas jóvenes como control de material no-embriogénico para los tres genotipos. Oe doce combinaciones de iniciadores SARP seleccionados, el par Me1-Em7 y el Me4-EM3- mostraron el mayor porcentaje de polimorfismo, 81 ,2 y 79,8 por ciento, respectivamente, correspondientes aun número específico de las transcripciones por el tejido y el genotipo. Se registró un total de 138 bandas de transcrito diferenciales al comparar las diferentes etapas de la embriogénesis y los genotipos. Además, se registraron 43 bandas diferenciales de muestras de hojas, que separa a los grupos genómicos de loS" tres genotipos analizad(S. La evaluación de los dendograma generados mediante el análisis de agrupamientos de medias aritméticas no-ponderadas (UPGMA) utilizando la información diferencial de los marcadores cDNA-SRAP, permitió visualizar y discriminar claramente transcritos de acuerdo al tipo de tejido y en la base a la etapas de desarrollo de la embriogénesis, así como al nivel de ploidia de los genotipos de examinados. Los resultados muestran que la técnica de cDNA-SRAP es reproducible y potencialmente puede ser adaptada para estudios relacionados con la expresión de genes de la embriogénesis somática y cigóticos, y el mapeo de transcriptoma, en Musa. Los fragmentos derivados de transcritos (TDF) regulados diferencialmente en las fases embriogénicos y tejidos de hojas jóvenes pueden ser aislados, clonados y secuenciados, con el fin de identificar aquellos directamente relacionados con la embriogénesis en Musa spp" y buscar su homologías en bases de datos.