Transformación genética de Tagetes erecta L. con los vectores pCambia 2301 y pBIN19::CLA1 vía Agrobacterium tumefaciens / Reyna Marilú Gómez Villa

Tesis (I.B.) .-- Instituto Tecnológico Superior del Sur del Estado de Yucatán, 2012.

Las plantas encierran un enorme potencial para la obtención a gran escala de productos químicos derivados de su metabolismo primario y secundario, a través de la manipulación genética de sus rutas biosintéticas. Entre ellas se encuentra el Cempasúchil (Tagetes erecta L.), cuya importancia industrial radica en su contenido del carotenoide luteína, utilizado por la industria como pigmento para los alimentos de gallinas de engorda. El presente trabajo se realizó con el propósito de evaluar algunas variables para la transformación genética estable de Tagetes erecta L., las variables que se evaluaron son: Diferentes concentraciones de acetosiringona (100-300 uM), condiciones de luz y oscuridad durante el período de co-cultivo, condiciones de temperatura (21-31°C) durante el co-cultivo, diferentes concentraciones de ácido okadaico (0.5- 3.00 uM), el efecto de la plasmólisis con diferentes concentraciones de sacarosa en el medio de cultivo (3-12 g), el efecto de los antioxidantes durante el pre-cultivo de los explantes. Para cada variable se utilizaron 60 meristemos de 1 día de corte, los cuales se obtienen de plantas de semillas germinadas de 15 días de edad. Estas variables se evaluaron con el plásmido pCAMBIA2301, para poder establecer las condiciones adecuadas de trasformación y posteriormente se evaluó el mejor rango de cada variable con el plásmido pBIN19::Cla1. Para el plásmido pCAMBIA2301 se obtuvieron resultados favorables en la evaluación de las variables: Acetosiringona (100 uM), temperatura (25 °C), en condiciones de oscuridad y en la plasmólisis (120 g sacarosa); sin embargo, al utilizar el ácido okadaico y los antioxidantes la expresión del gen gusA fue nula. Por lo que se evaluaron estos rangos en la transformación de meristemos con el plásmido pBin19::Cla1.