Construcción de un vector de silenciamiento basado en el Euphorbia mosaic virus Yucatan Peninsula (EuMV-YP) / Hernán de Jesús Villanueva Alonzo

Tesis (Doctorado en Ciencias Biológicas : Opción Bioquímica y Biología Molecular) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2013.

El silenciamiento génico inducido por virus (VIGS) es un método eficaz para la disminución específica de la expresión génica, que permite estudiar diversos aspectos de la biología como es la interacción planta patógeno. Entre las familias de virus que se han empleado para la construcción de los vectores VIGS destacan los geminivirus por su relativa facilidad para la modificación, su amplio rango de hospederos en cultivos de importancia económica e inoculación fácil y biosegura. Un miembro de esta familia es el Euphorbia mosaic virus Yucatán Península (EuMV-YP), previamente se demostró a nivel de laboratorio que es infectivo en Euphorbia heterophylla, Phaseolus vulgaris cv. Top, Capsicum annuum cv. Anaheim, Solanum lycopersicum cv. Humaya y Datura stramonium. Con la finalidad de obtener una herramienta molecular para estudiar la participación de diversos genes durante la interacción planta patógeno, modificamos el EuMV-YP en un vector de silenciamiento génico. Esto fue, sustituyendo parte del gen de la proteína de la cápside por un sitio múltiple de clonación e insertando posteriormente un fragmento del gen de la sub unidad I de la magnesio quelatasa (Chll) obteniendo el vector nombrado pEuMV-YP:AAV1:chll. La funcionalidad del vector fue evaluada en Nicotiana benthamiana, se encontró que el silenciamiento es mas eficaz en el tallo, peciolo y nervaduras, el silenciamiento se permaneció todo el ciclo de vida de la planta. Adicionalmente se determinó que el virus se puede replicar en otras plantas como: Arabidopsis thaliana, Nicotiana tabaccum, Ricinus communis, Jatropha curcas. Sin embargo la eficacia de pEuMV-YP:AAV1 :chll es significativamente menor en comparación con lo encontrado en N. benthamiana.