Validación de técnicas in vitro (fragmentos foliares y plántulas) en la interacción Mycosphaerella fijiensis - Musa acuminata / Abril Diane Canché Gómez

Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Biotecnología) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2013.

El hongo Mycosphaerella fijiensis es el agente causal de la enfermedad Sigatoka negra, la enfermedad foliar más devastadora del banano (Musa spp.) a nivel mundial. Sin embargo, a pesar de la importancia de este hongo fitopatógeno, aún se desconocen los genes involucrados en la patogenicidad; es por ello necesario realizar estudios de interacción a nivel molecular, pero también lo es contar con técnicas in vitro que sean validadas para realizar dichos estudios sin la interferencia de factores bióticos y abióticos, y cuyos resultados sean similares o lo más cercano a los observados en la infección en campo. Por tanto el objetivo de este trabajo fue validar la utilización de fragmentos foliares y plántulas in vitro como técnicas para realizar estudios moleculares en la interacción M. fijiensis-Musa ssp. Se evaluó indirectamente el crecimiento del hongo en cada técnica y se comparó con el del hongo en campo mediante una cuantificación absoluta por PCR tiempo real. Posteriormente dichas técnicas fueron evaluadas para el estudio de la expresión de genes, mediante el seguimiento de la expresión de un gen de interacción del hongo MfAvr4 por medio de una cuantificación relativa por PCR tiempo real. En fragmentos foliares se observó que el crecimiento y la expresión del gen MfAvr4 de M. fijiensis tuvieron una tendencia similar a la de hojas infectadas de campo. Mientras que en plántulas in vitro se observó un crecimiento comparable solo a las primeras etapas de la enfermedad en plantas infectadas de manera natural en campo; no fue posible evaluar la expresión del gen de interacción MfAvr4 en su totalidad debido a problemas en la síntesis de ADNc de las muestras. De acuerdo a estos resultados se concluye que la utilización de fragmentos foliares como técnica para estudios a nivel molecular, de expresión de genes de la interacción Mycosphaerella fijiensis-Musa spp fue validada al menos para el gen MfAvr4.