Clonación y caracterización de un ADN complementario que codifica para un factor de transcripción de la familia WRKY en Citrus sinensis / Alejandra Vera Aguilar

Tesis (Maestría en Ciencias Biológicas : Opción Biotecnología) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2014.

La citricultura representa una actividad agrlcola de suma importancia a nivel mundial por su importancia económica de producción, alto valor nutricional, importación y exportación a gran escala y la generación de millones empleos. La naranja dulce (Citrus sinensis) representa al cltrico más importante en cuanto a su producción, comercialización, importación y exportación y valor nutricional. México es el cuarto productor a nivel mundial de cftricos y el quinto lugar en producción de naranja dulce. La citricultura se ve amenazada por enfermedades ocasionadas por fitopatógenos que ponen en peligro la producción del cultivo. Las enfermedades más devastadoras que atacan a los cftricos son la cancrosis de los cltricos, causada por la bacteria Xanthomonas citri, y el Huanglongbing (HLB). La disponibilidad pública de la secuencia genómica de la naranja dulce nos brinda la oportunidad de estudiar los genes involucrados en la resistencia a enfermedades y la oportunidad de mejorar genéticamente a este cultivo. Dentro de los genes involucrados en la resistencia de la planta, se encuentran los factores de transcripción (FT) de la familia WRKY, los cuales juegan un papel muy importante en regular la expresión de genes de defensa. El gen AtWRKY18 de Arabidopsis thaliana funciona como un regulador positivo de la expresión de genes de defensa y su sobre-expresión en Arabidopsis conduce al aumento en la tolerancia contra la bacteria Pseudomonas syringae. El objetivo de la presente tesis fue clonar y caracterizar el ADN complementario de un homólogo del gen AtWRKY18 de A. thaliana en el genoma de C. sinensis. AsI como elaborar una construcción de expresión para transformar a la planta modelo tabaco con la finalidad de evaluar la función de este gen en la resistencia a patógenos en trabajos posteriores. Mediante la utilización de la secuencia AtWRKY18 de Arabidopsis se logró aislar una secuencia homóloga en el genoma secuenciado de C. sinensis, la cual nombramos como CsWRKY18. El análisis estructural y filogenético de esta secuencia mostró que pertenece a la clase lIa de la familia WRKY. En base a esta secuencia se diseñaron oligonucleótidos especlficos para aislar por RT-PCR el correspondiente marco de lectura abierto complét.o del ADN complementario. Esta secuencia se clonó en un vector de expresión y con dicha construcción se transformaron explantes de hoja de tabaco. Posteriormente se evaluó por PCR la presencia del transgén en la generación TO delas plantas transgénicas. Los resultados de este trabajo abren la posibilidad de generar resistencia a las enfermedades de origen bacteriano que más afectan al cultivo de la naranja dulce.