Subclonación del gen PR-8 en el vector de expresión PET-15B [recurso electrónico] / Abril Denisse Morales Jiménez

Tesis (I.B.) .-- Instituto Tecnológico de Mazatlán, 2013.

Haciendo uso de la ingeniería genética se han realizado grandes investigaciones y estudios para el mejoramiento de diversas especies; así mismo, se han empleado las diversas técnicas que comprende para la mejora de diversos procesos o procedimientos en numerosas ramas de estudio, tales como la medicina, la biotecnología, la biología molecular, entre otras. En esta tesis se aborda la clonación de un marco de lectura abierto (por sus siglas en inglés ORF) denominado PR-8 el cual fue predicho utilizando herramientas bioinformáticas. PR-8 fue amplificado mediante PCR y posteriormente insertado en el vector de expresión pET-15b utilizando una doble digestión con las enzimas de restricción NdeI y BamHI. La construcción fue introducida en la cepa de E. coli TOP10 mediante choque térmico y las clonas transformadas fueron seleccionadas en medio Luria Bertani (LB) más 100 µg.mL-1 de ampicilina. Mediante análisis in silico y análisis con enzimas de restricción se pudo comprobar la presencia del inserto dentro del vector; además se pudo demostrar su expresión mediante análisis funcionales basados en el halo de hidrólisis que mostró la subclona analizada cuando fue crecida en medio de cultivo LB semisólido con leche y Ampicilina.