Desarrollo de protocolos para la regeneración de Cocos nucifera L. a través de embriogénesis somática /
Luis Alfonso Saenz Carbonell
- 125 p. : il. ; 25 cm.
Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 1999.
La micropropagación de cocotero a través de embriogénesis somática es una alternativa prometedora para la propagación de material élite. Sin embargo, esta planta es extremadamente recalcitrante para la regeneración in vitro.Se desarrolló un protocolo de regeneración utilizando como explantes plúmulas procedentes del embrión cigótico. Se probaron modificaciones de la formulación del medio y de las condiciones de cultivo. Se encontró que la auxina el ácido 2,4-diclorofenoxiacético es esencial para la callogénesis y la formación de callo con estructuras embriogénicas y se definió la concentración óptima para lograr estas respuestas. La citocinina 6-bencilaminopurina interfiere con estos procesos. El proceso se favorece en la oscuridad y sin resiembras, pues de lo contrario se reduce la eficiencia. La disminución del contenido del ácido 2,4-diclorofenoxiacético, la adición de 6-bencilaminopurina y la condición de fotoperíodo fueron esenciales para la formación de embriones somáticos, su germinación y desarrollo a plántulas, las cuales se adaptaron exitosamente a las condiciones de vivero. El protocolo presentó mejores rendimientos, casi dos veces más para la formación de callo y cerca de diez veces para la formación de callo embriogénico, que los previamente reportados en la literatura para cultivos de inflorescencia. El medio utilizado contiene carbón activado para evitar daño al tejido por oxidación de fenoles. Estudios posteriores evaluando otras fuentes de carbón activado, permitieron duplicar la eficiencia de formación de callos con estructuras embriogénicas y el tiempo para lograrlo fue reducido a la mitad, lográndose con ello un gran avance en el esfuerzo por mejorar la eficiencia de la regeneración del cocotero. En paralelo, se desarrolló un protocolo de micropropagación que no incluyera carbón activado, para poder así evitar sus desventajas. Se logró obtener embriogénesis somática en medio libre de carbón activado. Sin embargo, los resultados indican que es preferible utilizar el carbón activado. Los estudios histológicos revelaron que en la plúmula en cultivo, el meristemo apical y, los primordios foliares crecieron, fusionándose para formar un tejido compacto que da lugar a un callo que presenta células meristemáticas en su periferia. Estas forman centros meristemáticos, los que posteriormente dan origen a embriones somáticos. En el medio de cultivo libre de carbón se realizaron estudios de absorción de ácido 2,4-diclorofenoxiacético por explantes de plúmula durante 4 meses, tiempo en el que se forman callos con estructuras embriogénicas. La mayor parte del ácido 2,4-diclorofenoxiacético en el tejido es tomado por las células hacia su interior. Su absorción ocurre gradualmente a lo largo de los 4 meses, pero en términos de concentración de la auxina en el tejido, ocurre un pico de acumulación durante el primer mes de cultivo, previo a la formación del callo. También se determinaron los niveles de citocininas endógenas, encontrándose evidencia de una posible relación inversa entre su concentración y la capacidad embriogénica en los callos.
COCOTERO--EMBRIOGENESIS SOMATICA. COCOTERO--RECURSOS DE GERMOPLASMA.