Estudios moleculares durante la embriogénesis somática en Coffea arabica /
Rafael Antonio Rojas Herrera
- 78 p. : il. ; 23 cm.
Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2002.
La embriogénesis somática (ES) fue descubierta en zanahora (Daucus carota), en la década de los 50s y desde entonces, éste ha sido el modelo más empleado para estudiar dicho fenómeno. Hasta la fecha se han clonado varios genes cuya expresión varía a lo largo de la inducción de la ES y el desarrollo de los embriones. Debido al amplio espectro de los productos codificados por estos genes, se hace difícil un análisis que integre los resultados publicados, así como la propuesta de un modelo que explique la reprogramación de las células somáticas y su canalización hacia la formación de un embrión somático. Básicamente, los genes que participan en este fenómeno pueden actuar en el inicio de esta reprogramación, en el tránsito de las estructuras embrionarias a través de diferentes estudios donde se establecen los patrones de órganos y tejidos de la futura planta, y en la maduración de los embriones, estadio del que se han clonado varios genes LEA y/o regulados por ABA, así como aquellos que pueden no tener un papel directo, pero que pueden ayudar en la formación de los embriones. Debido a su importancia económica y dado que la ES se obtuvo en este cultivo desde 1970, el café (Coffea spp.) puede ser un buen modelo para estos estudios en plantas tropicales perennes. En el presente trabajo, el objetivo fundamental fue estudiar la expresión diferencial de genes durante la inducción de la ES en Coffea arabica. Con este fin se utilizó el dspliegue diferencial de mensajeros, clonándose aquellos fragmentos de genes que mostraban expresión diferencial en los estadios tempranos de la inducción del proceso, en explantes foliares y suspensiones celulares. Un total de 23 fragmentos fueron clonados, entre los cuales se encontraron incrementos y disminuciones de los niveles de expresión. Para eliminar los falsos positivos obtenidos en los despliegues diferenciales, se desarrolló una metodología de "doc blot" inverso que permitió realizar estos análisis rápida y eficientemente. A partir de los fragmentos de genes clonados, se pudo constatar la complejidad de la ES y la diversidad de genes que participan en este proceso. Entre los fragmentos de genes clonados se encontró uno (AR-52), del que se pudo traducir conceptualmente un poliéptido altamente similar a quitinasas ácidas clase III. En otros modelos se ha observado que estas enzimas en los estadios tempranos de la inducción de la ES así como la inducción de la ES así como una regulación diferencial por herida. Los datos zimográficos mostraron la existencia de tres isoenzimas con regulación diferencial en condiciones de embriogénesis y no embriogénesis.
COFFEA ARABICA--CULTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO COFFEA ARABICA--EMBRIOGENESIS SOMATICA