Uso de diferentes estrategias para mejorar la micropropagación de cocotero a partir de explantes de plúmula y de inflorescencia inmadura /
Antonio Andrade Torres
- xxviii, 104 p. : il. ; 25 cm.
Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2011.
El cocotero (Cocos nucifera L.) es una especie de alto potencial económico, se ha demostrado que puede tener un papel importante en la producción de biodiesel y de bebidas energéticas. Sin embargo, su producción ha venido disminuyendo debido a la incidencia de plagas y enfermedades. La mejor estrategia para enfrentar estos problemas es la replantación con variedades resistentes, sin embargo, la propagación natural del cocotero, ocurre solo de manera sexual, y es muy dificil lograr la rápida propagación de los genotipos selectos para satisfacer la creciente demanda. La clonación in vitro vía embriogénesis somática es una alternativa conveniente debido a su gran potencial para la propagación masiva. En este trabajo se planteó realizar estudios que contribuyan a mejorar la micropropagación de cocotero a partir de explantes de plúmula o de tejidos de inflorescencia inmadura. Se estableció el protocolo para inducir callo embriogénico (CE) a partir de raquilla y ovario no fertilizado, y se aplicó el sistema de multiplicación de callo embriogénico de Pérez-Núñez et al. (2006) desarrollado para plúmula. Los resultados mostraron que es posible inducir la formación de callo embriogénico a partir de ambos explantes, además es posible la multiplicación del callo embriogénico y la obtención de embriones somáticos en ambos casos, y también es posible la embriogénesis somática secundaria en el caso de raquilla. En ambos casos, el comportamiento de los CEs es muy similar a lo reportado para plúmula. La secuencia de aminoácidos del gen CnSERKAA T amplificado en este estudio tiene una extensión de 629 aminoácidos similar a la reportada para CnSERK (GenBank AY791293) y ambas secuencias solo difieren en los aminoácidos 35, 308, 328, 341´ 558 y 608, pero no se afecta la funcionalidad de la proteína. Usando cualquiera de los dos juegos de cebadores diseñados en este trabajo es posible amplificar por RT -PCR el ADNc completo del gen CnSERK. La Aplicación de biorreactores BioMINT con un tratamiento de 2 minutos de inmersión cada 1 h y 2h favoreció el desarrollo de brotes de cocotero en comparación con los brotes control (medio-sólido), esto en base aun mejor desarrollo de características importantes como el incremento de número de hojas por brote, el incremento de brotes con raíz y el incremento de longitud de hojas y de raíz. El protocolo de transformación gen ética combinado (biobalística + infiltración + co-cultivo con Agrobacterium tumefaciens C58C1+ pER10W-35SRed) presentó mayor eficiencia de transformación que cualquiera de las técnicas aplicada de manera individual. Este trabajo ha contribuido a establecer las bases para la micropropagación masiva a partir de tejidos adultos y el establecimiento de un sistema de trasformación que podría tener utilidad para entender el proceso de embriogénesis somática, además de tener aplicaciones prácticas como la introducción de características agronómicas importantes.
COCOTERO--CULTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO COCOTERO--EMBRIOGENESIS SOMATICA COCOTERO--MICROPROPAGACION COCOTERO--PROPAGACION IN VITRO MARCADORES MOLECULARES MICROPROPAGACION VEGETAL