Silenciamiento del gen que codifica para la fosfolipasa c (PLC) en Coffea arabica L mediante ARN de interferencia / Wilberth Alfredo Poot Poot

Tesis (Doctorado en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2010.

El conocimiento de la función de cada uno de los componentes celulares es de importancia para poder entender y manipular cualquier célula o tejido. Por lo tanto, la transducción de señales mediada por las fosfolipasas es de interés debido a que la membrana plasmática es la barrera selectiva y el sitio de localización de proteínas y lípidos entre otros. La vía de señalización basada en fosfoinosítidos está localizada en las membranas y participa en diferentes procesos tales como los diferentes tipos de estrés entre los que se encuentran sequía, salinidad, ataque por patógenos y los metales. La fosfolipasa C (PLC) es una enzima que participa en esta vía de fosfoinosítidos produciendo dos segundos mensajeros de gran importancia celular. Es por esto, estamos interesados en desarrollar un protocolo de transformación y silenciamiento de la PLC utilizando protoplastos de C. arabica obtenidos a partir de suspensiones celulares. En nuestro trabajo logramos observar que el uso de polietilenglicol (PEG) en una concentración al 20 por ciento permitió distinguir un mayor número de protoplastos transformados a pesar que esta concentración redujo la viabilidad. Así mismo, se pudo observar que la velocidad de centrifugación adecuada para recuperar los protoplastos después de la transformación fue de 70 x g por 6 minutos. Por otra parte, también otro de los factores de importancia fue el medio de cultivo, nosotros evaluamos los medios W5 y MMG en los que los protoplastos de C. arabica no lograron mantenerse viables por largo tiempo. Sin embargo, se logró cultivar a los protoplastos por más de dos semanas en el medio de aislamiento de protoplastos después de transformados.