000			04031nam a2200253Ia 4500
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003			MX-MdCICY
005			20241009163741.0
008			230712t2003----mx-a###f#m---#000-0#spa-#
040			_cCICY
090			_aTM _bA24 2003
100	1		_aAcereto Escoffié, Pablo Oscar Martín
245	1	0	_aEstablecimiento de un protocolo de transformación mediado por Agrobacterium tumefaciens para Musa acuminata var. "Enano gigante" por infiltración al vacío / _cPablo Oscar Martín Acereto Escoffié
264	3	1	_aMérida, Yuc., _c2003
300			_a56 p. : _bil. ; _c23 cm.
502			_aTesis (Maestría en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2003.
520	3		_aEl rendimiento de los cultivos de Musa se ve afectado por factores bióticos como el ataque de nematodos, virus, hongos y bacterias así como por factores abióticos como sequías, inundaciones, ventarrones etc. Los cultivares de banano Cavendish son altamente estériles y por lo tanto difíciles de mejorar por métodos convencionales. La Transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens es una alternativa para la integración de nuevas características génicas que permitan el mejoramiento de los cultivares de banano. La transformación mediada por A. tumefaciens puede incrementarse por infiltración al vacío. Se efectúo un experimento con tejidos meristemáticos de banano no transformados, para determinar la concentración de kanamicina adecuada para ser empleada como agente de selección. La concentración determinada de kanamicina de 300 mg L-1, fue posteriormente redefinida a 150 mg L-1 por resultar la primera demasiado fuerte para los tejidos sometidos al estrés de transformación al vacío. Simultáneamente se verificó la capacidad de regeneración de los tejidos meristemáticos de banano a plántula. Posteriormente la cepa de A. tumefaciens EHA015 fue transformada introduciéndose en esta las siguientes combinaciones de vector-bacteria: a) pCambia 2301, b) el vector pCambia 2301 y el plásmido auxiliar pCH32 y c) el vector BIBAC2, el cual contiene un fragmento de ADN de 50 kb de la variedad de Calcuta IV. La transformación de A. tumefaciens se verificó por crecimiento en medio de selección con antibióticos y por ensayos de transformación en tabaco. Se realizaron ensayos preliminares de transformación con A. tumefaciens por infiltración al vacíó, los cuales permitieron establecer las siguientes condiciones de transformación: 18 horas de inducción con acetosiringona 100 fiM, 400 mm de mercurio de presión de infiltración, 4 minutos de tiempo de infiltración y 24 horas de tiempo de recuperación en medio MS. Se elimino A. tumefaciens de tejidos meristemáticos de banano infectados mediante tratamiento con 200 mg L-1 de timentina (3 9 de ticarcilina, 0.1 9 de ácido clavulónico) y claforan (cefalosporina cefotaxima) por 40 días. Se evaluó la transformación de tejido meristemático por la prueba histoquímica y actividad de [3-glucuronidasa así como por ensayos de PCR. Los ensayos de la prueba histoquímica de GUS permitieron observar actividad de [3- glucuronidasa en los tres sistemas de vector- bacteria ensayados. Se logró la máxima expresión de la prueba histoquímica en tejidos transformados con el vector pCambia 2301 y el plásmido auxiliar pCH32. La transformación positiva de los tejidos fue confirmada por ensayos de actividad específica de la [3-glucuronidasa. El establecimiento de un protocolo de extracción y limpieza de DNA, permitió confirmar la transformación positiva de tejidos de banano transformados con el vector pCambia 2301 y el plásmido auxiliar pCH32.
650	1	4	_aAGROBACTERIUM.
650	1	4	_aBIOTECNOLOGIA AGRICOLA.
700	1	2	_aGonzález Estrada, Tomás Augusto, _cDr., _eAsesor de tesis
700	1	2	_aRodríguez Zapata, Luis Carlos, _cDr., _eAsesor de tesis
856	4	0	_uhttp://cicy.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1003/908 _zVer el texto completo
942			_2Loc _cTE
999			_c4932 _d4932