Establecimiento de protocolos de solubilización con detergente y purificación por cromatografía de afinidad de la enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril -CoA reductasa de raíces transformadas de Catharanthus roseus (L.) G. Don / (Record no. 4803)

MARC details
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Transcribing agency CICY
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Classification number (OCLC) (R) ; Classification number, CALL (RLIN) (NR) TM
Local cutter number (OCLC) ; Book number/undivided call number, CALL (RLIN) G88 2000
100 1# - MAIN ENTRY--PERSONAL NAME
Personal name Gutiérrez Pacheco, Luis Carlos
245 10 - TITLE STATEMENT
Title Establecimiento de protocolos de solubilización con detergente y purificación por cromatografía de afinidad de la enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril -CoA reductasa de raíces transformadas de Catharanthus roseus (L.) G. Don /
Statement of responsibility, etc. Luis Carlos Gutiérrez Pacheco
264 31 - PRODUCTION, PUBLICATION, DISTRIBUTION, MANUFACTURE, AND COPYRIGHT NOTICE
Place of production, publication, distribution, manufacture Mérida, Yuc.,
Date of production, publication, distribution, manufacture, or copyright notice 2000
300 ## - PHYSICAL DESCRIPTION
Extent 106 p. :
Other physical details il. ;
Dimensions 23 cm.
502 ## - DISSERTATION NOTE
Dissertation note Tesis (Maestría en Ciencias y Biotecnología de Plantas) .-- Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2000.
520 3# - SUMMARY, ETC.
Summary, etc. La enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reductasa (HMGR) (EC 1.1.134) cataliza la síntesis del ácido mevalónico, a partir del cual, después de una serie de pasos enzimáticos, se forma el isopentenil pirofosfato (IPP), unidad principal de construcción que da lugar a toda la serie de compuestos isoprénicos que intervienen en múltiples procesos bioquímicos de las plantas. En células de mamíferos, la HMGR es la enzima clave en la regulación de la biosíntesis de hormonas, fitoalexinas y metabolitos secundarios como los alcaloides monoterpén-indólicos. En Catharanthus roseus se sintetiza un monoterpeno, la secologanina, el cual al condensarse con la triptamina produce la estrictosidina, alcaloide a partir del cual se sintetizan la serie completa de estos compuestos en las Apocinaceas. Dado que la HMGR no es monogénica en las plantas, existe la posibilidad de que se encuentre más de una isoenzima. El objetivo de este proyecto fue poner a prueba esta hipótesis. Para ello iniciamos la purificación de la HMGR membranal de raíces transformadas de Catharanthus roseus. Como pasos previos, se estandarizaron parámetros útiles para el proceso de purificación, tales como el tiempo y la concentración de proteinas necesarios para la reacción enzimática y cuyos valores óptimos fueron 10 minutos y 9 uL de volúmen de extracto vegetal (32.4 ug de proteína); la estabilidad enzimática de la HMGR a 4°C, que fue de 36 horas. Dado el carácter membranal de la HMGR, se ensayaron varios métodos de solubilización y los mejores resultados se obtuvieron con la congelación del extracto enzimático y su posterior incubación con 6 por ciento de detergente no iónico Brij W1 durante 30 minutos a 35° centigrados, y la aplicación de una doble centrifugación a 190,000xg. Para el proceso cromatográfico, se utilizó una columna de azul de sefarosa, de la que se eluyó la HMGR con un cambio instantáneo de concentración de KCI, lo que permitió purificar 5.26 veces la HMGR a partir del extracto enzimático solubilizado y con una actividad específica de 7.67 pkat mg-1 prot. El resultado obtenido de la electroforesis en un gel desnaturalizante sugiere que la HMGR de C. roseus podría estar compuesta de 4 subunidades de 50 kDa. Posteriormente se preparó una columna de afinidad de HMG-CoA sefarosa. Los resultados obtenidos en este trabajo mostraton la dificultad para purificar la HMGR; sin embargo, se estandarizaron los protocolos de la extracción, solubilización y estabilización de la enzima.
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element ALCALOIDES
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element CATHARANTHUS ROSEUS
General subdivision CULTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element CATHARANTHUS ROSEUS
General subdivision EMBRIOGENESIS SOMATICA
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element CATHARANTHUS ROSEUS
General subdivision INVESTIGACIONES
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element CATHARANTHUS ROSEUS
General subdivision RAICES TRANSFORMADAS
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element METABOLITOS SECUNDARIOS
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element METABOLITOS VEGETALES
650 14 - SUBJECT ADDED ENTRY--TOPICAL TERM
Topical term or geographic name entry element RAICES (BOTANICA)
700 12 - ADDED ENTRY--PERSONAL NAME
Personal name Loyola Vargas, Víctor Manuel,
Titles and other words associated with a name Dr.,
Relator term Asesor de tesis
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942 ## - ADDED ENTRY ELEMENTS (KOHA)
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  Clasificación local     Tesis CICY CICY Sección de tesis 09.10.2024   TM G88 2000 T0277 09.10.2024 09.10.2024 Tesis